果糖激酶（FRK）活性檢測試劑盒說明書

微量法

貨號：BC5925

規格：100T/96S

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 提取液：臨用前將粉劑一溶于提取液中；該試劑為懸濁液，使用前搖勻即可，2-8℃保存12周；

1. 試劑一：試劑放于試劑瓶內玻璃管中。臨用前加入2.667mL蒸餾水，充分溶解。溶解后的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融；

2. 試劑二：試劑放于試劑瓶內玻璃管中。臨用前加入3.03mL蒸餾水，充分溶解。溶解后的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融；

3. 試劑三：試劑放于試劑瓶內玻璃瓶中，臨用前加入6mL蒸餾水溶解，溶解后的試劑2-8℃分裝保存4周；

4. 試劑五工作液：臨用前根據樣本數量按照試劑五：蒸餾水=8μL:1000μL（共1008μL，約100T）的比例配制，充分混勻，現配現用；為了延長使用時間，此產品多給1支。

5. 試劑六：臨用前取一支試劑六加入1mL蒸餾水，充分溶解。溶解后的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復凍融。（該試劑為凍干試劑，可能存在不同瓶間肉眼觀察試劑量相差較大甚至量很少的現象，此現象不影響使用，實際質量相同）

產品說明：

果糖激酶（Fructokinase，FRK，EC 2.7.1.4）是催化果糖磷酸化的主要酶。果糖激酶可以作為植物的己糖感受器和信號分子，通過影響植物的生長周期來調控植物的代謝和生長發育進程，果糖磷酸化對于維持淀粉生物合成方向具有重要意義。

FRK催化果糖合成6-磷酸果糖，6-磷酸果糖在磷酸己糖異構酶的作用下異構為6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADH，NADH在340nm有特征吸收峰。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、分析天平、水浴鍋/恒溫培養箱、微量石英比色皿/96孔UV板、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體的操作步驟請見“產品資料"文件

注意事項：

1. 如果?A小于0.005，可以增加樣本量或延長反應時間再進行測定；如果?A測定大于0.6或A1測定小于A1空白，建議將樣本稀釋或者縮短反應時間再進行測定。注意同步修改計算公式。

實驗實例：

1. 取0.1023g土豆組織樣本，加入提取液進行冰浴勻漿，離心后取上清，按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計算：ΔA測定=A2測定-A1測定=0.137-0.080=0.057，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.001-0.001=0，ΔA=ΔA測定- ΔA空白=0.057。按樣本質量計算得：

FRK活性（U/g 質量）=321.54×ΔA÷W = 179.157U/g 質量。

2. 取0.06g酵母粉，加入提取液進行冰浴勻漿，離心后取上清，按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計算：ΔA測定=A2測定-A1測定=0.705-0.202=0.503，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.001-0.001=0，ΔA=ΔA測定- ΔA空白=0.503。按樣本質量計算得：

FRK活性（U/g 質量）=321.54×ΔA÷W =2695.58U/g 質量。

參考文獻：

[1] Giroix M H, Jijakli H, Courtois P, et al.Fructokinase activity in rat liver, ileum, parotid gland, pancreas, pancreatic islet, B and non-B islet cell homogenates.[J].International Journal of Molecular Medicine, 2006, 17(3):517-522.

[2] Kurt, Bergbauer, Ralf, et al. Studies on Fructose Metabolism in Cultured Astroglial Cells and Control Hepatocytes: Lack of Fructokinase Activity and Imrrunoreactivity in Astrocytes[J].Developmental Neuroscience, 2009, 18(5-6):371-379.

[3] Schaffer A A, Petreikov M. Inhibition of fructokinase and sucrose synthase by cytosolic levels of fructose in young tomato fruit undergoing transient starch synthesis[J].Physiologia Plantarum, 2010, 101(4):800-806.

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