全蛋白提取試劑盒（中）用于哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取總蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，作用較為溫和，可快速獲得總蛋白，可用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)，由于含有上述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。

產(chǎn)品組成:
 

操作方法:

1、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用；
稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直沒有明顯的組織塊，這個(gè)過程注意冰上操作；
將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g離心30min；
吸取上清新的管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)
2、細(xì)胞總蛋白的提取
裂解液的用量：107個(gè)細(xì)胞需要裂解液1ml；
貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，
將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min
懸浮細(xì)胞：4 oC 400g離心收集細(xì)胞，用冷的PBS洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，
渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次；
裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液4 oC 12000g離心30min；
將上清移入新的EP管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)

注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)過程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過程中的低溫環(huán)境；
PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因?yàn)镻MSF在水溶液中會(huì)快速降解；

操作方法:

1、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用；
稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直沒有明顯的組織塊，這個(gè)過程注意冰上操作；
將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g離心30min；
吸取上清新的管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)
2、細(xì)胞總蛋白的提取
裂解液的用量：107個(gè)細(xì)胞需要裂解液1ml；
貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，
將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min
懸浮細(xì)胞：4 oC 400g離心收集細(xì)胞，用冷的PBS洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，
渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次；
裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液4 oC 12000g離心30min；
將上清移入新的EP管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)

注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)過程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過程中的低溫環(huán)境；
PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因?yàn)镻MSF在水溶液中會(huì)快速降解；

操作方法:

1、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用；
稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直沒有明顯的組織塊，這個(gè)過程注意冰上操作；
將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g離心30min；
吸取上清新的管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)
2、細(xì)胞總蛋白的提取
裂解液的用量：107個(gè)細(xì)胞需要裂解液1ml；
貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，
將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min
懸浮細(xì)胞：4 oC 400g離心收集細(xì)胞，用冷的PBS洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，
渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次；
裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液4 oC 12000g離心30min；
將上清移入新的EP管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)

注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)過程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過程中的低溫環(huán)境；
PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因?yàn)镻MSF在水溶液中會(huì)快速降解；

操作方法:

1、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用；
稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直沒有明顯的組織塊，這個(gè)過程注意冰上操作；
將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g離心30min；
吸取上清新的管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)
2、細(xì)胞總蛋白的提取
裂解液的用量：107個(gè)細(xì)胞需要裂解液1ml；
貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，
將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min
懸浮細(xì)胞：4 oC 400g離心收集細(xì)胞，用冷的PBS洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，
渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次；
裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液4 oC 12000g離心30min；
將上清移入新的EP管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)

注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)過程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過程中的低溫環(huán)境；
PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因?yàn)镻MSF在水溶液中會(huì)快速降解；

操作方法:

1、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用；
稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直沒有明顯的組織塊，這個(gè)過程注意冰上操作；
將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g離心30min；
吸取上清新的管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)
2、細(xì)胞總蛋白的提取
裂解液的用量：107個(gè)細(xì)胞需要裂解液1ml；
貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，
將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min
懸浮細(xì)胞：4 oC 400g離心收集細(xì)胞，用冷的PBS洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，
渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次；
裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液4 oC 12000g離心30min；
將上清移入新的EP管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)

注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)過程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過程中的低溫環(huán)境；
PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因?yàn)镻MSF在水溶液中會(huì)快速降解；

相關(guān)文獻(xiàn)：

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《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影響因子:3.361 PMID:30502652
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《Actinidia chinensis planch polysaccharide protects against hypoxia?induced apoptosis of cardiomyocytes in vitro》 作者:Qiang Wang, Yunfa Xu, Ying Gao, Qi Wang 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:29750308
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《Cytotoxic Tricycloalternarene Compounds from Endophyte Alternaria sp. W-1 Associated with Laminaria japonica》 作者:Li Shen, Shu-Juan Tian , Hui-Liang Song , Xi Chen , Hao Guo, Dan Wan , Yu-Rou Wang , Feng-Wu Wang and Li-Jun Liu 期刊:Marine Drugs 影響因子:3.772 PMID:30360544
《Knockdown of BRCC3 exerts an anti?tumor effect on cervical cancer in vitro》 作者: Feifang Zhang， Qun Zhou 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:30272359
《Silencing of NOD2 protects against diabetic cardiomyopathy in a murine diabetes model》 作者: Lin Shen， Li Li， Man Li， Weiling Wang ，Wenbin Yin ，Wei Liu ，Yanyan Hu 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30221681
《Egr-1 is involved in coronary microembolization-induced myocardial injury via Bim/Beclin-1 pathway-mediated autophagy inhibition and apoptosis activation》 作者:Xian-tao Wang, Xiao-dan Wu, Yuan-xi Lu,Yu-han Sun, Han-hua Zhu,Jia-bao Liang,Wen-kai He and Lang Li 期刊:Aging (Albany NY) 影響因子:5.515 PMID:30391937
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《PSMD7基因在人食管鱗癌組織中的表達(dá)及影響癌細(xì)胞增殖、凋亡的機(jī)制研究》 作者:張進(jìn)忠，石科，郭丹，楊亮，閆秀明 期刊:中國(guó)癌癥雜志 影響因子: PMID:
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《The growth and pluripotency of mesenchymal stem cell on the biodegradable polyurethane synthesized with ferric catalyst》 作者:Qianqian Wei, Jiachang Jin, Xinyuan Wang, Qijun Shen, Mi Zhou, Shizhong Bu & Yabin Zhu 期刊:Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition 影響因子:2.121 PMID:29478369
《MiR-144-3p promotes the tumor growth and metastasis of papillary thyroid carcinoma by targeting paired box gene 8》 作者:Chang Liu, Chang Su, Yanchun Chen & Guang Li  期刊:Cancer Cell International 影響因子:23.916 PMID:
《The promotion on cell growth of androgen-dependent prostate cancer by antimony via mimicking androgen activity》 作者:Changwen Zhang，Penghao Li，Yingwu Wen，Guowei Feng，Yu Liu，Yangyi Zhang，Yong Xua，Zhihong Zhang 期刊:Toxicology Letters 影響因子:3.499 PMID:29462692
 

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