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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC3615-100T/48S
更新時間：2024-07-09
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1210
010-50973130
產品分類
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堿性木聚糖酶（BAX）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC3615
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 緩沖液 | 液體70 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 液體8 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 液體12 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
標準品：10mg木糖。臨用前加入667μL蒸餾水配制成100μmol/mL的木糖標準液，2-8℃保存8周。
產品說明：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養物質的吸收利用，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業中，堿性木聚糖酶（BAX）一般分離自最適生長pH為9-11的微生物。
BAX在堿性環境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發生顯色反應，在540nm處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產生的還原糖量成正比，通過測定反應液在540nm吸光值增加速率，可計算BAX活力。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機、水浴鍋、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、發酵液：發酵液于8000rpm，4℃，離心15min，取上清，置冰上作為待測樣本。
2、組織樣本：稱0.1g組織，加入1mL緩沖液，冰上充分研磨。4℃，8000rpm離心15min，取上清置冰上待測。
3、酶干粉：稱1mg，加1mL緩沖液溶解后置冰上待測。
注：含還原糖較高的樣本（如植物果實等）可用蒸餾水進行適當稀釋后再進行測定。
二、測定步驟
可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至540nm，分光光度計用蒸餾水調零。
標準溶液的稀釋：臨用前按下表將標準品稀釋為6、5、4、3、2、1μmol/mL的標準溶液待測。
| 序號 | 稀釋前濃度（μmol/mL） | 標準品體積（μL） | 蒸餾水體積（μL） | 稀釋后濃度（μmol/mL） |
| 1 | 100 | 100 | 900 | 10 |
| 2 | 10 | 120 | 80 | 6 |
| 3 | 10 | 100 | 100 | 5 |
| 4 | 10 | 80 | 120 | 4 |
| 5 | 10 | 60 | 140 | 3 |
| 6 | 10 | 40 | 160 | 2 |
| 7 | 10 | 40 | 360 | 1 |
備注：實驗中每管需要60μL。
樣本測定（在EP管中加入下列試劑）
| 試劑名稱（μL） | 對照管 | 測定管 | 空白管 | 標準管 |
| 樣本 | 60 | 60 | - | - |
| 標準品 | - | - | - | 60 |
| 蒸餾水 | - | - | 60 | - |
| 緩沖液 | 90 | 90 | 90 | 90 |
| 試劑一 | - | 60 | 60 | 60 |
| 渦旋混勻，置于50℃水浴鍋中反應30min，立即沸水浴中10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開，以免進水，改變了反應體系) | ||||
| 試劑一 | 60 | - | - | - |
| 試劑二 | 90 | 90 | 90 | 90 |
| 渦旋混勻，沸水浴中準確顯色5min(注意不要讓蓋子爆開，以免進水改變了反應體系)，冷卻至室溫后，吸取200μL于96孔板或微量玻璃比色皿中，盡快測定各管540nm下的吸光度，分別記為A對照、A測定、A空白、A標準。計算ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標準=A標準-A空白。空白管和標準曲線只需測1-2次。每個測定管需設一個對照管。 | ||||
注意事項：
吸光度變化應該控制在0.01~1.2之間，否則加大樣本量或稀釋樣本，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數。
實驗實例：
取0.1179g橙子加入1mL緩沖液進行勻漿研磨，取上清用蒸餾水稀釋10倍后按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對照=1.194-1.040=0.154，帶入標曲y=0.2017x-0.1171（R2=0.999），計算x=1.344，按樣本質量計算BAX活性得：BAX活力（U/g 質量）= x÷W2÷30×F =1.344÷0.1179÷30×10=3.80 U/g 質量。
取泡菜汁離心取上清按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對照=0.925-0.169=0.756，帶入標曲y=0.2017x-0.1171（R2=0.999），計算x=4.329，按發酵液計算BAX活力得：BAX活力（U/mL）= x÷T×F =4.329÷30×1=0.144U/mL。
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