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專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC2305-100T/48S
更新時間：2024-07-08
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1806
010-50973130
產(chǎn)品分類
堿性蛋白酶（AKP）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC2305
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體55mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體20mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 液體4mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：臨用前加入4mL蒸餾水，充分溶解；2-8℃保存8周。
試劑二：臨用前取1瓶加入4mL提取液，沸水浴中攪拌溶解；2-8℃保存8周。
標(biāo)準(zhǔn)品：20μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)酪/酸。
產(chǎn)品說明：
AKP是指在堿性條件下催化蛋白質(zhì)肽鍵水解的酶類，屬于絲*酸蛋白酶。此外，該酶還能夠水解酯鍵、酰胺鍵，具有轉(zhuǎn)酯及轉(zhuǎn)肽的功能。該酶是主要工業(yè)用酶之一，廣泛應(yīng)用于制藥、絲綢、食品、制革等行業(yè)。
在堿性條件下，AKP水解酪蛋白生成酪/酸；在堿性條件下，酪/酸還原磷鉬酸生成鎢藍(lán)；鎢藍(lán)在680nm有特征吸收峰，測定680nm吸光度增加速率，來計算AKP活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
研缽/勻漿器、臺式離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、1.5 mL EP管和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
稱約0.1g組織，加入1mL提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待測。或直接稱取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待測。
二、測定步驟
分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至680nm，蒸餾水調(diào)零。
試劑一、試劑二和試劑三置于40℃水浴保溫30min以上。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：臨用前將20μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋80倍至0.25μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。
樣本測定：(1.5mLEP管中分別加入下列試劑)
| 試劑名稱（µL） | 對照管 | 測定管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
| 粗酶液 | 20 | 20 | - | - |
| 試劑一 | 40 | - | ||
| 試劑二 | - | 40 | ||
| 混勻后40℃水浴保溫10min | ||||
| 試劑一 | - | 40 | ||
| 試劑二 | 40 | - | ||
| 混勻后10000rpm 4℃離心10min，取上清 | ||||
| 上清 | 40 | 40 | - | - |
| 蒸餾水 | - | - | 40 | - |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | - | - | - | 40 |
| 試劑三 | 200 | 200 | 200 | 200 |
| 試劑四 | 40 | 40 | 40 | 40 |
| 混勻后40℃水浴保溫20min | ||||
取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于680nm測定光吸收，分別記為A對照管、A測定管、A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管。
并計算ΔA測定=A測定管-A對照管、ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次
注意事項：
若反應(yīng)較弱，（A測定管-A對照管）差值較小，可適當(dāng)延長反應(yīng)時間（20-30min），即第一步水浴時間，最后計算酶活時對公式進(jìn)行修改。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC2280/BC2285 酸性蛋白酶（ACP）活性檢測試劑盒
BC2290/BC2295 中性蛋*酶（NP）活性檢測試劑盒
堿性蛋白酶(AKP)活性檢測試劑盒
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