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產(chǎn)品中心生化檢測(cè)試劑盒-常量法淀粉系列BC5050-50T/24S血清淀*酶活性檢測(cè)試劑盒 淀粉
產(chǎn)品型號(hào)：BC5050-50T/24S
更新時(shí)間：2024-07-07
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：911
010-50973130
產(chǎn)品分類
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血清淀*酶（AMY）活性檢測(cè)試劑盒（碘-淀粉比色法）說明書
可見分光光度法
貨號(hào)：BC5050
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
規(guī)格 | 保存條件 | |
試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體60mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三A | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三B | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前加入25mL試劑二，置于常溫水中并加熱至煮沸，期間不斷攪拌粉劑至溶解；用不完的試劑2-8℃保存1個(gè)月。
2、 試劑三的配制：將試劑三A倒入試劑三B中，用蒸餾水定容至20mL，2-8℃避光保存一個(gè)月。
3、 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg淀粉標(biāo)準(zhǔn)品。臨用前加10mL試劑二，置于常溫水中并加熱至煮沸，配成1mg/mL淀粉標(biāo)準(zhǔn)液。用不完的試劑2-8℃保存1個(gè)月。
產(chǎn)品說明：
血清淀*酶( Serum amylase， AMY) 屬于α-淀*酶，以無規(guī)則方式水解多糖分子內(nèi)部的α-1,4糖苷鍵，生成寡聚糖、麥芽糖和葡萄糖的混合物。AMY主要由唾液腺和胰腺分泌，另外近端十二指腸、肺、子宮、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌。
AMY催化淀粉分子中的α-1,4糖苷鍵水解，產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖以及糊精等，碘可以與未被水解的淀粉結(jié)合，生成在570nm下有特征吸收峰的復(fù)合物，其深淺可計(jì)算出淀*酶的活力單位。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：
一、 粗酶液提取
取100μL血清和400μL蒸餾水混合（即將血清稀釋5倍），分為2管250μL分別作為測(cè)定管和對(duì)照管。若實(shí)驗(yàn)后所測(cè)數(shù)值偏大或者偏小，可以調(diào)整稀釋比例（比如數(shù)值偏小可以將200μL血清和300μL蒸餾水混合即將血清稀釋2.5倍）
二、 測(cè)定步驟和加樣表
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至570nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將淀粉標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3、 按操作表依次加入各試劑：
測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 空白管1 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管2 | |
血清稀釋液 | 250 | 250 | - | - | - |
蒸餾水 | - | - | 250 | - | 250 |
標(biāo)準(zhǔn)溶液 | - | - | - | 250 | - |
試劑一 | 500 | - | 500 | - | - |
試劑二 | - | 500 | - | 500 | 500 |
在37℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫10min | |||||
試劑三 | 250 | 250 | 250 | 250 | 250 |
混勻后于15min內(nèi)測(cè)定570nm處測(cè)定管、對(duì)照管、空白管1、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管2的吸光度，分別記為A測(cè)定、A對(duì)照、A空白1、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白2，計(jì)算ΔA測(cè)定=（A空白1-A空白2）-（A測(cè)定-A對(duì)照），ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白2。標(biāo)準(zhǔn)曲線、空白管1、空白管2做1-2次即可。
三、AMY活性計(jì)算
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
以ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程y=kx+b。將ΔA測(cè)定帶入方程得到x（mg/mL）。
2、按照血清體積計(jì)算：
單位定義：每mL血清每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個(gè)酶活性單位。
AMY活性 (U/mL)= x×V樣÷V樣÷T×F =0.1×x×F
V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，10min；F：稀釋倍數(shù)。
注意事項(xiàng)：
1. ΔA測(cè)定大于1.5時(shí)，可以對(duì)樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后測(cè)定。
2. 反應(yīng)完成后需在15min內(nèi)測(cè)定吸光度。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、 取100μL牛血清和400μL蒸餾水混合（即血清稀釋5倍）后，按照測(cè)定步驟操作，計(jì)算ΔA測(cè)定= （A空白1-A空白2）-（A測(cè)定-A對(duì)照）=（1.137-0.029）-（0.986-0.012）=0.134，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.9683x+0.0082，計(jì)算x=0.0639，按公式計(jì)算活性：
AMY（U/mL）=0.1×x×F =0.1×0.0639×5=0.0320 U/mL。
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血清淀*酶活性檢測(cè)試劑盒 淀粉 血清淀*酶活性檢測(cè)試劑盒 淀粉
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