對F-actin進行定性和定量分析 羅丹明標記鬼筆環肽
貨號：CA1610
規格：300T
英文名稱 : TRITC Phalloidin 
別名 : 羅丹明鬼筆環肽 
分子式 : C60H70N12O13S2 
分子量 : 1231.4 
外觀（性狀） : 紫色粉末（凍干粉） 
單位 : 瓶

溶解性（Solubility）:溶于DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液（20%）
多肽序列（Sequence）:TRITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6)

背景描述
    鬼筆環肽（Phalloidin）是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）的環狀七肽毒素，以高親和力（Kd= 20 nM）選擇性結合于絲狀肌動蛋白F-actin，而不會與單體肌動蛋白G-actin結合，通常用來標記組織切片，細胞培養物或無細胞體系中的F-actin，從而對F-actin進行定性和定量分析。另外，鬼筆環肽衍生物也以相近的親和力結合于大小纖維，無論是動植物來源的肌肉細胞或非肌肉細胞，按照每一個肌動蛋白亞基約與一個鬼筆環肽分子的計量比結合。且非特異性結合幾乎可忽略，染色區域和非染色區域辨識度非常明顯。因此，鬼筆環肽衍生物特別適合替代肌動蛋白（Actin）抗體進行相關研究。另外鬼筆環肽衍生物很小，直徑約12-15?，分子量＜2000 Daltons，未標記肌動蛋白（Actin）的許多生理特性都得以維持，比如，同肌動蛋白結合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能發生反應；鬼筆環肽標記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質；以及甘油抽提的肌纖維標記后仍可收縮等。

    鬼筆環肽（Phalloidin）的結合阻止絲狀肌動蛋白（微絲）的解離，穩定微絲結構，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發生的臨界濃度（CC）降＜1μg/mL，因此，可用作一種聚合促進劑。此外，鬼筆環肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。

    本品為TRITC（四甲基異硫氰酸羅丹明）標記的鬼筆環肽，染色反應特異性強，對比性高，具有比Actin抗體更好的染色效果，適合用作F-actin的定性和定量檢測。另外，經本品結合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學特性。且本品的結合沒有物種差異性，適用性廣泛。

    我司提供儲存液形式（貨號：CA1610，濃度為20μM）的TRITC標記鬼筆環肽，用戶根據自身需求選擇。建議使用濃度為80~200nM。

運輸與保存方法

    冰袋運輸。-20℃避光干燥保存， 1年有效。

注意事項

1）鬼筆環肽具有毒性，需小心操作（對人的半數致死劑量LD50約2mg/kg）。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

需要自備材料

1）（可選）甲醇
2）1×PBS緩沖液, pH 7.4, 細胞培養（貨號：P1020）
3）固定液4%多聚甲醛（溶于PBS緩沖液）（貨號：P1110）
4）丙酮或透化液0.5% Triton X-100（溶于PBS緩沖液）
5）Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（不含DAPI），DAPI
6）（可選）DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（含DAPI）
7）（可選）BSA，標準
8）載玻片和蓋玻片
9）蓋玻片周圍密封液（如透明指甲油）
10）組裝有TRITC激發/發射濾片，以及DAPI激發/發射濾片的熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡

操作步驟

1. 工作液準備

    對于TRITC標記鬼筆環肽（貨號：CA1610，300T）

    本品以溶于甲醇的20μM儲存液形式提供，總量為300μl。按照100 nM的工作液濃度來換算，可制備總量為60 ml的工作液。建議收到產品后，根據單次使用量，對母液進行小量分裝，-20℃避光凍存，一年穩定。

    開始實驗前，使用1×PBS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：80~200nM。工作液現配現用。

2.染色步驟

1）細胞爬片生長24h，使其密度達到50%匯合度。

2）吸掉培養液，37℃預熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細胞2次。

3）使用溶于PBS的4%甲醛溶液進行細胞固定，室溫固定10min。

注意：避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。

4）室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min。

5）室溫條件下，用丙酮（≤-20℃）脫水或者用0.5% Triton X-100溶液透化處理5min。

6）室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min。

7）取200μl配制好的TRITC標記鬼筆環肽工作液，覆蓋住蓋玻片上的細胞，室溫避光孵育30min（通常情況下，4℃~37℃孵育皆可）。

注意：為了降低背景，可于TRITC標記的鬼筆環肽工作液內加入1% BSA；另外，孵育過程中為了避免溶液揮發，可將蓋玻片轉移到一個密封的容器內。

8）用PBS清洗蓋玻片3次，每次5min。

9）使用200μl DAPI溶液（濃度：100 nM）對細胞核進行復染，約30s。

10）用PBS清洗蓋玻片，然后倒置在已經滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕檫掉多余封片劑，然后用指甲油*封片。此法制備的標本玻片可置于4℃避光保存，通常6個月內可繼續做F-actin染色分析。

注意：也可以直接使用含有DAPI的抗熒光淬滅封片劑（貨號：36308ES11）合并步驟9）10），簡化步驟。

11）熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察，選擇TRITC激發/發射濾片（Ex/Em=545/570nm）和DAPI激發/發射濾片（Ex/Em=364/454nm）。

對F-actin進行定性和定量分析 羅丹明標記鬼筆環肽訂購說明：

1、絕大部分產品備有現貨，一般情況下都能訂貨當日發貨。 
2、部分非常用產品，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂。 
3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準。 
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當日不能發貨的將于次日安排發貨。
5、請辦理完貨款后，將收據、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運輸說明：

1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產品：常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。