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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC4440-50T/48S
更新時間：2024-04-16
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1538
010-50973130
產品分類
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半纖維素含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號: BC4440
規格: 50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體30 mL×1瓶 | 常溫保存 |
提取液二 | 液體30 mL×1瓶 | 常溫保存 |
試劑一 | 液體60 mL×1瓶（自備） | 2-8℃保存 |
試劑二 | 2-8℃保存 | |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：80%乙醇自備；
2、 標準品：10 mg D-木糖。臨用前加入1 mL蒸餾水溶解配制成10 mg/mL的標準溶液。2-8℃保存4周。
產品說明：
半纖維素是指在植物細胞壁中與纖維素共生、可溶于堿溶液，遇酸后遠較纖維素易于水解的那部分植物多糖，廣泛存在于植物中，其分布因植物種屬、成熟程度、早晚材、細胞類型及其形態學部位的不同而有很大差異。一種植物往往含有幾種由兩或三種糖基構成的半纖維素，其化學結構各不相同。半纖維素是一種新型的可利用能源。
半纖維素在一定條件下水解為還原性糖類，還原糖在堿性條件下與3，5-二硝基水楊酸（DNS）加熱被氧化成糖酸及其它產物，DNS則被還原為棕紅色3-氨基-5-硝基水楊酸，在540nm處具有特征吸收峰，通過吸光值的變化即可定量檢測半纖維素的含量
技術指標：
低檢出限：0.2311 mg/mL
線性范圍：0.4-2.5 mg/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、可見分光光度計、臺式離心機、恒溫水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽、30~50目篩、蒸餾水、EP管。
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
樣本自然風干或用烘箱烘干至恒重，研缽充分研磨后，過30~50目篩。
1、 分光光度計預熱30 min以上，調節波長至540 nm，蒸餾水調零。
2、 標準液的稀釋：將10 mg/mL的標準溶液用蒸餾水稀釋至2.5、2、1、0.8、0.6、0.4 mg/mL標準溶液待測。
3、 標準液稀釋可參考下表：
序號 | 稀釋前濃度（mg/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（mg/mL） |
1 | 10 | 50 | 150 | 2.5 |
2 | 10 | 40 | 160 | 2 |
3 | 10 | 50 | 450 | 1 |
4 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
5 | 1 | 120 | 80 | 0.6 |
6 | 1 | 80 | 120 | 0.4 |
備注：實驗中每個標準管需125µL標準溶液。
4、 操作表（在1.5 mL EP管中操作）：
試劑名稱 | 空白管 | 測定管 | 標準管 |
樣本（g） | 0.05 | ||
試劑一（μL） | 1000 | ||
漩渦混勻，90℃水浴10 min，25℃，8000 g離心10 min，棄上清留沉淀 | |||
蒸餾水（μL） | 1000 | ||
漩渦混勻，25℃，8000 g離心10 min，棄上清，此步驟重復三次，取沉淀，烘干至恒重 | |||
提取液一（μL） | 500 | 500 | |
90℃水浴1 h，自然冷卻至室溫 | |||
提取液二（μL） | 500 | 500 | |
漩渦混勻，25℃，8000 g離心10 min，取上清待測 | |||
上清液（μL） | 125 | 125 | |
標準液（μL） | 125 | ||
試劑二（μL） | 125 | 125 | 125 |
蒸餾水（μL） | 750 | 750 | 750 |
漩渦混勻，90℃水浴5 min，自然冷卻至室溫 | |||
取1 mL反應液于1 mL玻璃比色皿中，在540 nm下測定吸光值A，分別記為A空白、A測定、A標準，計算ΔA標準=A標準-A空白，ΔA測定=A測定-A空白。標準曲線和空白管只需測定1-2次。 | |||
1、標準曲線的繪制：
根據標準管的濃度（y，mg/mL）和吸光度ΔA標準（x，ΔA標準），建立標準曲線。根據標準曲線，將ΔA測定（x，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（y，mg/mL）。
2、半纖維素含量的計算：
半纖維素含量（mg/g 干重）= y×V樣總÷W×F= y÷W×F
V樣總：加入提取液體積，1 mL；W：樣本質量，g；F：稀釋倍數。
注意事項：
1、如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。
2、建議將加入提取液二離心后的上清液稀釋10~20倍后檢測。計算公式中注意乘以稀釋倍數。
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