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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC0950-50T/48S
更新時間：2024-04-24
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：2062
010-50973130
產品分類
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琥珀酸脫氫酶（SDH）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0950
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 液體60 mL×1瓶 | -20℃保存 |
| 試劑二 | 液體0.6 mL×1支 | -20℃保存 |
| 試劑三 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 液體4mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑五 | 液體3mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：為易揮發試劑，用完后盡快密封，-20℃保存；
產品說明：
SDH（EC 1.3.5.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。SDH是線粒體的一種標志酶，位于線粒體內膜上的一種膜結合酶，是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外，為多種原核細胞產能的呼吸鏈提供電子。
SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸（PMS）傳遞還原*（DCPIP），并且在600nm處具有特征吸收峰，通過600nm吸光度的變化，測定2,6-DCPIP的還原速度，代表SDH酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：
測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置，以免變性失活。
若ΔA大于0.5，需將酶液用酶提取液稀釋，使ΔA小于0.5，可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以稀釋倍數。
實驗實例：
取0.1g腎臟加入1mL試劑一和10uL試劑二，用冰浴勻漿器勻漿充分研磨，4 ℃ 11000g離心10min，取上清置冰上。按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A1測定-A2測定=0.82-0.681=0.139，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.905-0.904=0.001，按樣本質量計算酶活得：
SDH活性（U/g 質量）=1571.111×（ΔA測定-ΔA空白）÷W=2168.13 U/g 質量。
參考文獻：
Fattoretti P, Bertoni-Freddari C, Caselli U, et al. Impaired succinic dehydrogenase activity of rat Purkinje cell mitochondria during aging[J]. Mechanisms of ageing and development, 1998, 101(1-2): 175-182.
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