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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC1500-50T/24S
更新時間：2024-04-07
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1754
010-50973130
產品分類
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植物硝態氮含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC1500
規格：50T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
試劑一 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前根據用量每瓶加入2 mL濃硫酸充分溶解；配制好后盡快使用，2-8℃可保存一周。
2、 標準品：10 mg硝酸鉀，臨用前加入0.935 mL 蒸餾水溶解，配成1400 μg/mL的NO3-N標準液。
產品說明：
硝酸鹽是植物吸收的主要含氮物質之一。硝酸鹽在植物體內的還原部位不同，可以在根內，也可以在枝葉內進行，且因植物類別和環境條件而異。因此，測定植物體內硝態氮含量變化對了解氮代謝機制有重要的意義。
在濃酸條件下，NO3-可以與水楊酸反應，生成硝基水楊酸，后者在PH>12的條件下呈黃色，在一定范圍內，其顏色深淺與含量成正比，可比色測定計算硝態氮含量。
技術指標：
低檢出限：0.7534 μg/mL
線性范圍：0.875-84 μg/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、濃硫酸、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
按照質量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，室溫勻漿后置于90℃恒溫水浴鍋中浸提30min，期間不斷晃動或者置于90℃恒溫搖床中振蕩提取30min，待冷卻后于25℃，12000g離心15min，取上清待測。
二、測定步驟
1. 分光光度計預熱30min以上，調節波長至410nm，蒸餾水調零。
2. 將1400μg/mL NO3-N標準液用蒸餾水50倍稀釋成28μg/mL的標準溶液。
3. 操作表：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
樣本（μL） | 40 | 40 | ||
標準溶液（μL） | 40 | |||
蒸餾水（μL） | 60 | 40 | ||
試劑一（μL） | 60 | - | 60 | 60 |
充分混勻，25℃靜置30min | ||||
試劑二（μL） | 1400 | 1400 | 1400 | 1400 |
混勻，渦旋振蕩，使出現的沉淀充分溶解，取1mL于1mL玻璃比色皿中測定410nm處吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。 | ||||
三、植物NO3-N的計算
1. 按樣本質量計算
NO3- N含量（μg/g 質量）=ΔA÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷W=28×ΔA÷ΔA標準÷W
2. 按樣本蛋白濃度計算
NO3- N含量（μg/mg prot）=ΔA÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷（Cpr×V提取）=28×ΔA÷ΔA標準÷Cpr
W：樣本質量，g；C標準：標準溶液濃度，28μg/mL；V提取：樣本總體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。
注意事項：
1．試劑一和試劑二均具有強腐蝕性，操作時需做好防護措施。
2．如果樣本吸光值大于1.4，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進行測定。
實驗實例：
1、 取0.1g蘋果加入1mL蒸餾水進行樣本處理，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.560-0.002=0.558，ΔA標準管=A標準管-A空白管=0.563-0.01=0.553，按樣本質量計算含量得：
NO3-N含量（μg/g質量）=28×ΔA÷ΔA標準÷W=28×0.558÷0.553÷0.1=282.5 μg/g質量。
2、 取0.1g葉片加入1mL蒸餾水進行樣本處理，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.907-0.645=0.262，ΔA標準管=A標準管-A空白管=0.563-0.01=0.553，按樣本質量計算含量得：
NO3-N含量（μg/g質量）=28×ΔA÷ΔA標準÷W=28×0.262÷0.553÷0.1=132.7 μg/g質量。
相關發表文獻：
[1] Fuyuan Zhu,Moxian Chen,Wailung Chan,et al. SWATH-MS quantitative proteomic investigation of nitrogen starvation in Arabidopsis reveals new aspects of plant nitrogen stress responses. Journal of Proteomics. September 2018;(IF3.537)
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