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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC4410-50T/24S
更新時間：2024-04-16
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：870
010-50973130
產品分類
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土壤尿酸酶活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC4410
規格：50T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體2 mL×1瓶（自備） | 2-8℃保存 |
試劑二A液 | 液體0.5 mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二B液 | 液體17.5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、試劑一：自備甲苯；
2、試劑二：臨用前按照試劑二A液︰試劑二B液= 1︰35的比例混合，根據樣本量所需使用當天現配現用；
3、標準品：5 µmol/mL的尿酸溶液。
產品說明：
土壤尿酸酶（Soil Uricase，S-UR）是一種與核酸代謝有關的氧化還原酶，主要是將土壤中的核酸腺嘌呤與尿酸等物質轉化成尿*素和尿囊酸，進而生成尿素供植物利用。
土壤尿酸酶能夠催化尿酸生成尿*素、CO2和H2O2，尿酸在284 nm有特征吸收峰，通過測定反應前后尿酸的減少量，來表示土壤尿酸酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、研缽、可調式移液器、1 mL石英比色皿、冰、30~50目篩、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
操作步驟：
一、 樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。
二、測定步驟
1、紫外分光光度計預熱30 min以上，調節波長至284 nm，蒸餾水調零。
2、將5 µmol/mL標準溶液用蒸餾水倍比稀釋為0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 µmol/mL標準溶液待用。
3、標準液稀釋可參考下表：
序號 | 稀釋前濃度（µmol/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（µmol/mL） |
1 | 5 | 50 | 450 | 0.5 |
2 | 0.5 | 200 | 200 | 0.25 |
3 | 0.25 | 200 | 200 | 0.125 |
4 | 0.125 | 200 | 200 | 0.0625 |
5 | 0.0625 | 200 | 200 | 0.03125 |
6 | 0.03125 | 200 | 200 | 0.015625 |
備注：實驗中每個標準管需150µL標準溶液。
4、加樣表：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 無土管 | 標準管 | 空白管 |
風干土樣（g） | 0.1 | 0.1 | - | - | - |
試劑一（μL） | 25 | 25 | 25 | - | - |
充分振蕩，使土樣全部濕潤，室溫放置30 min。 | |||||
試劑二（μL） | 500 | - | 500 | - | - |
蒸餾水（μL） | 500 | 500 | 500 | - | - |
試劑三（μL） | 500 | 1000 | 500 | - | - |
振蕩混勻，30℃恒溫培養24 h；10000 rpm，25℃，離心10 min，取上清。 | |||||
上清液（μL） | 150 | 150 | 150 | - | - |
標準液（μL） | - | - | - | 150 | - |
蒸餾水（μL） | - | - | - | - | 150 |
試劑四（μL） | 850 | 850 | 850 | 850 | 850 |
充分混勻，于1 mL石英比色皿中測定284 nm處吸光值，記為A測定管、A對照管、A無土管、A標準管和A空白管。計算ΔA測定=（A無土管-空白管）-（A測定管-A對照管）、ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設一個對照管，同一批次樣本檢測無土管、空白管只需檢測1-2管，標準曲線只需測1-2次。
三、土壤尿酸酶活性計算
1、 標準曲線的繪制：
根據標準管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據標準曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，μmol/mL）。
2、 土壤尿酸酶活性的計算：
酶活定義：每天每g土樣中消耗1 μmol的尿酸定義為一個酶活力單位。
土壤尿酸酶活力（U/g 土樣）＝x×V反總÷W÷T=1.525x÷W
T：反應時間，1 d = 24 h；V反總：反應體系總體積：1.525 mL；W：樣本質量，g。
實驗實例：
1、 稱取兩管2-1-20號土樣0.1g，按照操作步驟進行測定，測得計算ΔA=（A無土管-空白管）-（A測定管-A對照管）=（1.136-0.001）-（0.703-0.05）=0.482，帶入標準曲線y=1.7444x - 0.0013，計算x=0.2771，按照計算公式計算酶活得：
土壤尿酸酶活力（U/g 土樣）= 1.525×x÷W=1.525×0.2771÷0.1=4.226 U/g 土樣。
土壤尿酸酶活性檢測試劑盒
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