北京索萊寶自產生化試劑 BL21(DE3)感受態(tài)細胞
貨號：C1400
規(guī)格：10×100ul / 20×100ul
保存：-70℃保存，運輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存少一年，-70℃保存少 6 個月。
產品簡介：
本公司生產的BL21（DE3）感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌BL21（DE3）菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19 質粒檢測，轉化效率可達 10 7 ，-70℃保存 6 個月轉化效率不改變。
基因型：F_ ompT hsdSB（rB_mB_）dcm gal（DE3）
特點：該菌株用于高效表達克隆于含有噬菌體 T7 啟動子的表達載體（如 pET 系列）的基因。T7 噬菌體RNA 聚合酶位于 λ 噬菌體 DE3 區(qū)，該區(qū)整合于 BL21 的染色體上。該菌適合表達非毒性蛋白。
操作方法：  （以下各步驟均為無菌操作）
1、將感受態(tài)細胞置于冰上融化，以下實驗以 100ul 感受態(tài)細胞為例。
2、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA，注意目的 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，冰浴放置 30 分鐘。
3、將離心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘，注意不要搖動離心管。
4、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基，37℃ 180rpm 振蕩培養(yǎng) 1 小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5、取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培養(yǎng) 12-16 小時。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調整，如轉化的 DNA 總量較多，可取 100ul 左右的轉化產物涂板；反之，如轉化的 DNA總量較少，可取 200-300ul 的轉化產物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。
北京索萊寶自產生化試劑 BL21(DE3)感受態(tài)細胞
注意事項：
1、感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。
2、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它 DNA 或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
3、轉化時，轉化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源 DNA 量過多或體積過大
反而會降低轉化效率。轉化時 DNA 體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。
4、轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數(shù)/鋪板 DNA 總量。
5、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失降到低。
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北京索萊寶自產生化試劑 BL21(DE3)感受態(tài)細胞