北京索萊寶科技
專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC4380-50T/48S
更新時間：2024-04-16
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：892
010-50973130
產品分類
血氨含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC4380
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體45 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一A液 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一B液 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前根據樣本量按照試劑一A液：試劑一B液=0.4mL：1.6mL（共2mL，約5T）的比例進行配制，現配現用；
2、 標準品：100μmol/mL 氮標準液；
3、 2μmol/mL 氨標準液：臨用前吸取20μL 100μmol/mL 氮標準液和980μL蒸餾水混合均勻配制成2μmol/mL 氮標準液備用，作為標準管標準溶液使用。
產品說明：
血氨主要來源是內源性氨和外源性氨。氨在血中保持恒定狀態，即血氨的來源和去路保持動態平衡。氨是有毒物質，主要在肝臟進行代謝解毒。當肝功能嚴重損害時，氨不能被解毒。氨在中樞神經系統聚集，從而導致肝性腦病。
本法根據氨的靛酚藍反應原理，通過蛋白沉淀劑將血清（漿）中蛋白沉淀后，利用酚-次氯酸鹽直接顯色法測定血氨，生成的藍色靛酚和氨的濃度成正比，在630 nm處有特殊吸收峰，據此可由吸光值計算出樣本中血氨的含量。本試劑盒可測各種動物血清（漿）等樣本中血氨的含量，樣本禁止溶血。檸檬酸鈉、肝*鈉、EDTA等抗凝劑對實驗均無影響。
技術指標：
低檢出限：0.0258 μmol/mL
線性范圍：0.125-3 μmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、蒸餾水、EP管。
操作步驟：
一、 測定步驟
1、 分光光度計預熱30 min以上，調節波長至630 nm，蒸餾水調零。
2、 操作表：（在1.5 mL EP管中操作）
試劑名稱（µL） | 空白管 | 測定管 | 標準管 |
血清（漿） | - | 120 | - |
標準品 | - | - | 120 |
蒸餾水 | 120 | - | - |
提取液 | 600 | 600 | 600 |
充分混勻，8000 rpm離心10 min，取上清待測 | |||
上清液 | 400 | 400 | 400 |
試劑一 | 400 | 400 | 400 |
試劑二 | 400 | 400 | 400 |
充分混勻，37℃水浴20 min | |||
取1 mL反應液，于1 mL玻璃比色皿中測定630 nm處吸光值A，分別記為A空白管、A測定管、A標準管。計算ΔA= A測定管-A空白管，ΔA標準= A標準管-A空白管。標準管和空白管只需測1-2次。 | |||
二、血氨含量計算
血氨含量（μmol/mL）= C標準×ΔA÷ΔA標準×V樣÷V樣= 2×ΔA÷ΔA標準
V樣：加入的樣本體積，0.12 mL；C標準：標準溶液濃度，2μmol/mL。
注意事項：
1. 試劑一配制后盡快使用，若發現變色則不能使用。
2. ΔA若小于0.01，建議增加量，同時減少提取液體積（如200μL血清（漿）+520μL提取液）；若ΔA若大于1.0，建議減少樣本量，同時提高提取液體積或者稀釋上清液進行測定，注意同步修改計算公式或者乘以稀釋倍數。
3. 所用器材和取血裝置均應無氨；采血后應立即測定，樣本禁止溶血。不能立即測定2-8℃可保留2h。
實驗實例
取馬血清按照測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA= A測定管-A空白管=0.311-0.005=0.306，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.553-0.005=0.548，計算含量得：
血氨含量（μmol/mL）=2×ΔA÷ΔA標準=1.117 μmol/mL。
取胎牛血清按照測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA= A測定管-A空白管=0.280-0.005=0.275，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.553-0.005=0.548，計算含量得：
血氨含量（μmol/mL）=2×ΔA÷ΔA標準=1.004 μmol/mL。
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