血氨含量檢測試劑盒說明書

微量法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

貨號：BC4385

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：臨用前根據(jù)樣本量按照試劑一A液：試劑一B液=100μL：400μL（共0.5mL，約5T）的比例進行配制，現(xiàn)配現(xiàn)用；

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：100μmol/mL 氨標(biāo)準(zhǔn)液；

3、 2μmol/mL 氨標(biāo)準(zhǔn)液：臨用前吸取20μL 100μmol/mL 氨標(biāo)準(zhǔn)液和980μL蒸餾水混合均勻配制成2μmol/mL 氨標(biāo)準(zhǔn)液備用，作為標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。

產(chǎn)品說明：

血氨主要來源是內(nèi)源性氨和外源性氨。氨在血中保持恒定狀態(tài)，即血氨的來源和去路保持動態(tài)平衡。氨是有毒物質(zhì)，主要在肝臟進行代謝解毒。當(dāng)肝功能嚴(yán)重損害時，氨不能被解毒。氨在中樞神經(jīng)系統(tǒng)聚集，從而導(dǎo)致肝性腦病。

本法根據(jù)氨的靛酚藍反應(yīng)原理，通過蛋白沉淀劑將血清（漿）中蛋白沉淀后，利用酚-次氯酸鹽直接顯色法測定血氨，生成的藍色靛酚和氨的濃度成正比，在630 nm處有特殊吸收峰，據(jù)此可由吸光值計算出樣本中血氨的含量。本試劑盒可測各種動物血清（漿）等樣本中血氨的含量，樣本禁止溶血。檸檬酸鈉、肝*鈉、EDTA等抗凝劑對實驗均無影響。

技術(shù)指標(biāo)：

低檢出限：0.0251 μmol/mL

線性范圍：0.0625-6 μmol/mL

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、蒸餾水、EP管。

操作步驟：

一、測定步驟

1、 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至630 nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。

2、 操作表：（在1.5 mL EP管中操作）

二、血氨含量計算

血氨含量（μmol/mL）= C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣÷V樣= 2×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

V樣：加入的樣本體積，0.04mL；C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，2μmol/mL。

注意事項：

1. 試劑一配制后盡快使用，若發(fā)現(xiàn)變色則不能使用。

2. ΔA若小于0.01，建議增加量，同時減少提取液體積（如80μL血清（漿）+160μL提取液）；若ΔA若大于1.0，建議減少樣本量，同時提高提取液體積或者稀釋上清液進行測定，注意同步修改計算公式或者乘以稀釋倍數(shù)。

3. 所用器材和取血裝置均應(yīng)無氨；采血后應(yīng)立即測定，不能立即測定2-8℃可保留2h；樣本禁止溶血。

實驗實例

取馬血清按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算ΔA= A測定管-A空白管=0.256-0.056=0.200，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.386-0.056=0.330，計算含量得：

血氨含量（μmol/mL）=2×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=1.212 μmol/mL。

取胎牛血清按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算ΔA= A測定管-A空白管=0.224-0.056=0.168，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.386-0.056=0.330，計算含量得：

血氨含量（μmol/mL）=2×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=1.018 μmol/mL。

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