木質素含量檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC4205
規格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液配制：

1. 試劑三：自備，石 油 醚，約需要35mL。（石油 醚沸程：30～60℃）

2. 試劑四：該試劑具有強揮發性和一定的毒性，注意在通風櫥操作并且每次用完用封口膜密封保存。

3. 試劑五：試劑有腐蝕性，注意防護。

產品說明：
木質素是構成植物細胞壁的成分之一，具有使細胞相連的作用。木質素存在于木質組織中，主要作用是通過形成交織網來硬化細胞壁，為次生壁主要成分。
木質素中的酚羥基發生乙酰化后在280nm處有特征吸收峰，280nm的吸光值高低與木質素含量正相關。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、微量石英比色皿/96孔UV板（非聚苯乙烯材質）、可調式移液槍、研缽、EP管、封口膜、冰乙酸、石油 醚、30-50目篩和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
樣本80℃烘干至恒重，研磨，過 30-50目篩，稱取約3mg于1.5mLEP管中。
二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至280nm，分光光度計用冰乙酸調零。

2. 操作表（在1.5mL離心管中依次加入下列試劑）：

乙酰化：

測定：（注：由于冰乙酸易揮發，請混勻后立即測定！建議混勻一管測一管）

三、木質素含量計算
1、按微量石英比色皿計算：
木質素含量（mg/g）=ΔA÷ε÷d×V檢測÷（V上清×W÷V乙酰化）=1.3105×ΔA÷W
木質素的百分含量（%）=木質素含量÷1000×100%=0.13105×ΔA÷W
V乙酰化：乙酰化反應體積，0.612mL；ε：木質素消光系數，23.35mL/mg/cm；d：比色皿光徑，1cm；V上清：上清液體積，0.012mL；V檢測：檢測體積，0.6mL；W：樣本質量，g；1000：換算系數，1g=1000mg。
2、按96孔UV板進行計算：
將上述公式中的d-1cm修改為d-0.6cm（96孔板光徑）進行計算即可。
注意事項：

1. 試劑四有毒性，請操作時做好防護措施，加熱前必須用封口膜密封，以防氣體溢出。

2. 加熱過程中有劇烈反應，震蕩時輕搖，以免壓力過大噴出造成人身傷害。

3. 冰乙酸具有強刺激性，建議操作過程全部在通風櫥內操作。

4. 取上清加冰乙酸步驟根據自己樣本乙酰化程度，冰乙酸的用量可調整，保證吸光值在0.1-0.8之間即可，并在公式中參與計算。

5. 由于冰乙酸具有揮發性，建議用比色皿進行測定實驗。實驗混勻后必須立即測定！

相關發表文獻：

1. Liang R, Zhao J, Li B, et al. Implantable and degradable antioxidant poly (ε-caprolactone)-lignin nanofiber

membrane for effective osteoarthritis treatment[J]. Biomaterials, 2020, 230: 119601.
參考文獻：
[1] Goldschmid O. Determination of phenolic hydroxyl content of lignin preparations by ultraviolet spectrophotometry[J]. Analytical Chemistry, 1954, 26(9): 1421-1423.
[2] Janshekar H, Brown C, Fiechter A. Determination of biodegraded lignin by ultraviolet spectrophotometry[J]. Analytica Chimica Acta, 1981, 130(1): 81-91.
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