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當前位置:首頁產品中心生化檢測試劑盒-常量法其它系列BC4180-50T/48S莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒 其它系列

莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒 其它系列
產品簡介:

儲存條件
-20℃
中文名稱
莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒 其它系列
有效期
6個月
單位

英文名稱
Shikimic acid Dehydrogenase(SD) Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規格
50T/48S

產品型號:BC4180-50T/48S

更新時間:2024-04-12

廠商性質:生產廠家

訪 問 量 :847

服務熱線

010-50973130

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產品介紹


莽草酸脫氫酶(SD活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號: BC4180
規格: 50T/48S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱規格保存條件
提取液液體60 mL×1瓶2-8℃保存
試劑一液體20 mL×1瓶2-8℃保存
試劑二粉劑×12-8℃保存
試劑三粉劑×2-20保存
溶液的配制:
  1. 提取液:內含不溶物,用前搖勻。

  2. 試劑二:臨用前加入10 mL蒸餾水溶解。

  3. 試劑臨用前每瓶加入11 mL蒸餾水溶解。

  4. 工作液的配制:根據用量按照試劑一:試劑二:試劑三為7:4:8的體積比例充分混勻,現用現配,用前25℃預熱15min

產品說明:
莽草酸途徑是存在于植物和微生物中的一條重要的代謝途徑,莽草酸脫氫酶(EC 1.1.1.25) 是莽草酸合成代謝途徑中催化第四步反應的關鍵酶。
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產生NADPH,檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。
Shikimic Acid +NADP               NADPH(340nm)
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
自備的儀器和用品
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻
1組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液(加入前搖勻))進行冰浴勻漿,然后8000g,4℃,離心10min取上清置于冰上待測。
2細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3液體:直接檢測。
二、測定步驟具體操作步驟詳見“產品資料"附件
  1. 紫外分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。

  2. 工作液25℃預熱10min以上

  3. 操作表:在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑

試劑名稱空白管測定管
工作液(µL)950950
樣本(µL)-50
蒸餾水(µL)50-
加入樣本即開始計時,充分混勻后于340nm處測定20s時的吸光值A15min20s時的吸光值A2,計算ΔA測定管=A2測定-A1測定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。

注意事項
  1. 樣本提取上清液置于冰上待測,且樣本提取完成后建議2h內測完。

  2. 樣本的蛋白濃度需自行測定,由于提取液中含有一定濃度的蛋白(約1mg/mL),所以測定樣本蛋白濃度時需扣除提取液自身蛋白濃度。

  3. ΔA大于1時,建議將樣本稀釋后再進行測定。ΔA小于0.01時,可以延長反應時間(10min15min)來測定。

  4. 空白管為檢測各試劑組分質量的檢測孔,正常情況下,變化不超過0.01

實驗實例:
  1. 0.1g蘿卜葉,加入1mL提取液,進行樣本處理,取上清按照測得步驟操作,測得計算ΔA測定管=A2測定-A1測定=1.441-1.201=0.24ΔA空白管=A2空白-A1空白=0ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.24,按照樣本質量計算得:SD酶活(U/g 質量)=643×ΔA÷W=1543.2 U/g 質量。

相關系列產品:

BC2030/BC2035 異檸檬酸裂解酶(ICL)活性檢測檢測試劑盒
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 莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒 其它系列 莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒 其它系列

 

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