酪*酸酶（Tyr）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照說明書操作。
貨號：BC4055
規格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前每瓶加入7 mL提取液充分溶解待用，現配現用。溶解后易氧化，24h內要盡快用完。

2. 試劑三：臨用前加入1.65mL蒸餾水充分溶解待用，該試劑為飽和溶液，若有析出可置于45℃水浴鍋加熱溶解；用不完的試劑2-8℃保存4周。

產品說明：
酪*酸酶（tyrosinase；EC1.14.18.1）是一種單酚單加氧酶，是具有雙功能的含銅糖蛋白，廣泛存在于植物、酵母和動物組織中。酪*酸酶是生物體合成黑色素的關鍵酶，也是引起果蔬酶促褐變的主要因素，同時也對昆蟲的免疫及生長有重要影響。
酪*酸酶催化L-多巴生成多巴醌，其與MBTH生成紫紅色物質，在505nm下有特征吸收峰，據此可以計算出酪*酸酶的活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。
需自備的儀器和用品：
   可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：
1、當樣本ΔA測定大于1時，建議將樣本用蒸餾水稀釋后測定。計算時注意同步修改計算公式。
實驗實例：

1. 取0.1055g大鼠脾組織加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定-A空白=0.153-0.083=0.070，按樣本質量計算酪*酸酶活性得：酪*酸酶活性（U/g 質量）=103.7×ΔA測定÷W×F=68.81U/g 質量。

2. 取0.1020g綠蘿加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后用蒸餾水稀釋8倍按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定-A空白=1.037-0.083=0.954，按樣本質量計算酪*酸酶活性得：酪*酸酶活性（U/g 質量）=103.7×ΔA測定÷W×F =7759.2U/g 質量。

3. 取27μL豬血清后按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定-A空白=0.429-0.083=0.346，按樣本液體體積計算酪*酸酶活性得：酪*酸酶活性（U/mL）=103.7×ΔA測定=35.88U/mL。

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