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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC1610-50T/48S
更新時間：2025-08-26
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1880
010-50973130
產品分類
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木質素過氧化物酶（Lip）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1610
規格：50T/48S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體85mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體11mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體6mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
產品說明：
木質素過氧化物酶（EC1.11.1.14）（Lip）是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶，是木質素的生物降解過程中的主要木質素降解酶類。Lip在飼料資源開發以及廢水、廢物處理領域有著廣闊的應用前景。藜蘆醇可以被Lip催化發生氧化反應，其產物藜蘆醛在310nm處有最大吸收峰，以藜蘆醇為反應底物，通過測定310nm處藜蘆醛的吸光值，可以判定Lip的酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、可調式移液器、超聲波細胞破碎儀、研缽/勻漿器、1mL石英比色皿、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織：按照樣本質量（g）：試劑一體積（mL）為1:5~10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿；10000g 4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2、細菌或細胞樣本：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為 500~1000:1 的比例（建議500萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一）加入試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率300W，超聲 3s，間隔 7s，總時間3min），10000g 4℃離心10min，取上清置冰上待測。
3、培養液或其他液體：直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進行測定。
二、測定步驟
1、可見分光光度計預熱30min以上，調節波長至310nm，蒸餾水調零。
2、測定前根據實驗用量取出部分試劑一、試劑二、試劑三置于37℃預熱10min以上。若一次性測定樣本過多，可根據使用量將試劑一、二、三按6:2:1比例配成工作液后進行預熱，測定時按照100μL樣本+900μL工作液加入1mL石英比色皿進行測定。
3、加樣表（在 1mL石英比色皿中依次加入下列試劑)：
試劑名稱（μL） | 測定管 |
試劑一（μL） | 600 |
試劑二（μL） | 200 |
樣本（μL） | 100 |
試劑三（μL） | 100 |
將上述試劑分別加入1mL石英比色皿后迅速吹打混勻，從加完最后一個試劑開始計時，記錄第15s的吸光值A1，將混合液置于37℃水浴鍋/恒溫培養箱培養5min，取出測定5min15s時的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1，注意保證測定時間的準確性。
三、Lip活力的計算
1.按樣本蛋白質濃度計算
酶活定義：37℃，pH4.5條件下，每mg組織蛋白每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。
Lip活性（U/mg prot）= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣×Cpr)÷T=215.05×ΔA÷Cpr
2.按樣本質量計算
酶活定義：37℃，pH4.5條件下，每g組織每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。
Lip活性（U/g 質量）= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣÷V樣總×W)÷T=215.05×ΔA÷W
3.按細菌/細胞數量計算
酶活定義：37℃，pH4.5條件下，每104細菌/細胞每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。
Lip活性（U/104 cell）= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣÷V樣總×細胞數量)÷T=215.05×ΔA÷細胞數量
4、 按照樣本體積計算
酶活定義：37℃，pH4.5條件下，每mL血清或液體樣本每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需酶量為一個酶活單位。
Lip活性（U/mL）=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V樣÷T=215.05×ΔA
ε：藜蘆醛摩爾消光系數：9300L/mol/cm；d:比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體積，0.001L；V樣：加入樣本體積，0.1mL，V樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，5 min；109：單位換算系數，1mol=109nmol。
實驗實例：
取0.09g杏鮑菇加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清置冰上，之后按照測定步驟操作，測得計算A1=0.228，A2=0.55，ΔA=A2-A1=0.322，按樣本質量計算酶活得：
Lip活性（U/g 質量）=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V樣÷T=672.95U/g 質量。
參考文獻：
[1] Konadu K T, Harrison S, Osseo-Asare K. et al. Transformation of the carbonaceous matter in double refractory gold ore by crude lignin peroxidase released from the white-rot fungus[J]. International Biodeterioration & Biodegradation, 2019, 143(1996):104735.
[2] Ahmed A A Q, Mckay T J M. Potential of Bacillus sp. LG7 as a Promising Source of Ligninolytic Enzymes for Industrial and Biotechnological Applications[J]. Proceedings of the National Academy of ences India, 2017.
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