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當前位置:首頁產品中心生化檢測試劑盒-常量法其它系列BC3170-50T/48S乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒 其它

乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒 其它
產品簡介:

儲存條件
-20℃
中文名稱
乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒 其它
有效期
6個月
單位

英文名稱
Acetokinase(ACK) Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規格
50T/48S

產品型號:BC3170-50T/48S

更新時間:2025-08-26

廠商性質:生產廠家

訪 問 量 :1490

服務熱線

010-50973130

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產品介紹


乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號BC3170
規格50T/48S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱規格保存條件
提取液液體50 mL×1瓶2-8℃保存
試劑一液體30 mL×1瓶2-8℃保存
試劑二粉劑×12-8℃保存
試劑三粉劑×2-20℃保存
試劑四粉劑×2-20℃保存
試劑五粉劑×1-20℃保存
試劑六液體95 μL×12-8℃保存
試劑七液體110 μL×1-20℃保存
試劑八粉劑×12-8℃保存
試劑九粉劑×12-8℃保存
溶液的配制:
  1. 提取液:臨用前將試劑九加入到提取液中,并于2-8℃保存;

  2. 試劑二:臨用前每瓶加入4 mL蒸餾水,充分溶解待用。用不完的試劑仍2-8℃保存;

  3. 試劑三:臨用前每瓶加入3 mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑-20℃保存;

  4. 試劑四:臨用前每瓶加入2 mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑-20℃保存;

  5. 試劑五:臨用前每支加入1 mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑-20℃保存;

  6. 試劑六:液體置于試劑瓶內EP管中。臨用前根據樣本量將試劑蒸餾水按43:457(V:V)的比例配制備用,現用現配;

  7. 試劑七:液體置于試劑瓶內EP管中。臨用前根據樣本量將試劑蒸餾水按1:9(V:V)的比例配制備用,現用現配;

  8. 試劑八:臨用前加入5 mL蒸餾水,充分溶解待用。用不完的試劑仍2-8℃保存;

  9. 工作液:吸取0.3 mL 試劑二、1 mL試劑三、0.65 mL試劑四、0.2 mL試劑五、0.2 mL試劑六、0.2 mL試劑七、1 mL試劑八混勻,也可根據比例現用現配于冰上備用。

產品說明:
ACK廣泛存在于生物體內,催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP,是細菌碳代謝和能量代謝的關鍵酶,尤其是在古細菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。
測定原理如下:(1)ACK催化乙酸鈉和ATP生成乙酰磷酸和ADP,(2)*酸激酶催化ADPPEP生成ATP和*酮酸,(3)乳酸脫氫酶催化丙*酸和NADH生成乳酸和NAD+,(4)在340nm下測定NADH氧化生成NAD+

速率,即可反映ACK活性。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
自備的儀器和用品
臺式離心機、紫外分光光度計、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。
操作步驟具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項:
  1. 測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置,以免變性和失活。

  2. 比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。

  3. ΔA大于1時,建議稀釋后測量,注意計算公式乘以稀釋倍數;ΔA小于0.01時,建議延長反應時間測量,注意計算公式變化。

實驗實例:
  1. 取0.1g腎臟組織樣本,加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清后按照測定步驟操作,測得計算ΔA測定=A測定1-A測定2=1.893-1.147=0.746,ΔA空白=A空白1-A空白2=1.453-1.448=0.005,ΔA=ΔA測定-ΔA空白= 0.746-0.005=0.741,按樣本質量計算酶活得

ACK(U/g 質量)=536×ΔA÷W=536×0.741÷0.1=3971.76 U/g 質量
  1. 500萬大腸桿菌加入1mL提取液超聲破碎,離心,取上清后按照測定步驟操作,測得計算ΔA測定=A測定1-A測定2=1.476-1.448=0.028,ΔA空白=A1-A空白2=1.453-1.448=0.005,ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.028-0.005=0.023,按細菌數量計算酶活得

ACK(U/104 cell)=1.072×ΔA=1.072×0.023=0.0247 U/104 cell。
參考文獻:
  1. Mukhopadhyay S, Hasson M S, Sanders D A. A continuous assay of acetate kinase activity: Measurement of inorganic phosphate release generated by hydroxylaminolysis of acetyl phosphate[J]. Bioorganic chemistry, 2008, 36(2): 65-69.

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