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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC2050-50T/48S
更新時間：2025-08-26
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：3011
010-50973130
產品分類
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硫化氫（H2S）含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC2050
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體 60mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體10mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體25mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體25mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
產品說明：
硫化氫（H2S）是一種新型氣態信號分子，存在于腦內的神經遞質，生理濃度的H2S對神經系統海馬的長時程增強功能具有重要的調節作用，并對自發性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發揮著重要的病理生理效應。其在植物中也具有促進種子萌發、調節植物氣孔、增強光合作用等作用，同時還會影響植物體內的氧化還原平衡和物質代謝。
H2S與N, N-二甲基對苯二胺和硫酸鐵銨等反應生成亞甲基藍，亞甲基藍在665nm處有最大吸收峰，通過測定其吸光值可計算H2S含量。
H2S + N, N-Dimethyl-p-Phenylenediamine + Ferric Ammonium Sulfate Methylene Blue(665nm)
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1. 細菌或培養細胞樣本：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：提取液一體積（mL）=500-1000:1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔7s，總時間3min），12000g 4℃離心10min；然后取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，12000g 4℃離心10min，取上清置于冰上待測。
2. 組織樣本：按照組織質量（g）：提取液一體積（mL）為1:5-10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液一），進行冰浴勻漿；12000g 4℃離心10min；然后取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，12000g 4℃離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清（漿）或其它液體樣本：取100μL血清（漿）或其它液體樣本加入1mL提取液一，12000g 4℃離心10min；然后取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，12000g 4℃離心10min，取上清置于冰上待測。
二、測定步驟
1. 分光光度計預熱30min以上，調節波長至665nm，蒸餾水調零。
2. 加樣表（按順序在EP管中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） | 測定管 | 空白管 |
樣 本 | 250 | - |
蒸餾水 | - | 250 |
試劑一 | 375 | 375 |
試劑二 | 375 | 375 |
充分混勻，室溫靜置10min后，665nm處測定各管吸光值A，分別記為A測定、A空白，計算ΔA=A測定-A空白。空白管只需測1~2次。
三、H2S含量計算
以標準溶液濃度（nmol/mL）為x軸，以其對應的吸光值為y軸，繪制標準曲線，得到標準方程y = 0.0026x-0.0268，R2 = 0.9973；將ΔA帶入公式中得到x（nmol/mL）。
1. 按照樣本質量計算
H2S含量（nmol/g 質量）= x×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）=1.1875×x÷W
2. 按照樣本蛋白濃度計算
H2S含量（nmol/mg prot）= x×V樣÷（Cpr×V樣）=x÷Cpr
3. 按照細胞數量計算
H2S含量（nmol/104 cell）= x×（V上清+V提取液二）÷（cells×V上清÷V提取液一）=1.1875×x÷cells
4. 按照液體體積計算
H2S含量（nmol/mL）= x×（V上清+V提取液二）÷[V液體×V上清÷（V提取液一+V液體）]= 13.0625×x
V上清：提取時上清液的體積：0.8mL；V提取液一：加入提取液一的體積：1mL；V提取液二：加入提取液二的體積：0.15mL；V樣本：反應液中加入樣本的體積，0.25mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；cells：細胞數量，104個；V液體：液體樣本體積：0.1mL。
注意事項：
1. 如果ΔA值過低或接近空白值，建議增加樣本量后再進行測定；如果ΔA＞0.6，建議稀釋樣本后再進行測定，計算公式中要乘以相應的稀釋倍數。
2. 提取液中含有蛋白沉淀劑，若按蛋白濃度計算需要另取樣本重新提取測定蛋白濃度
實驗實例：
1、 取0.1g小鼠肝臟按照樣本提取步驟處理，按照測定步驟操作，使用玻璃比色皿測定665nm處反應液吸光度，計算ΔA= A測定-A空白=0.090-0.026=0.064，將ΔA代入標準方程y = 0.0026x-0.0268，R2 = 0.9973，按照樣本質量計算含量得：
H2S含量（nmol/g 質量）= x×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）= 414.71nmol/g 質量。
2、 取0.1g銀杏*片按照樣本提取步驟處理，按照測定步驟操作，使用玻璃比色皿測定665nm處反應液吸光度，計算ΔA= A測定-A空白=0.081-0.026=0.055，將ΔA代入標準方程y = 0.0026x-0.0268，R2 = 0.9973，按照樣本質量計算含量得：
H2S含量（nmol/g 質量）= x×（V上清+V提取液二）÷ （W×V上清÷V提取液一）=373.61nmol/g 質量。
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