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專(zhuān)注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品中心
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產(chǎn)品中心生化檢測(cè)試劑盒-常量法輔酶Ⅱ系列BC1100輔酶ⅡNADP(H)含量檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品型號(hào)：BC1100
更新時(shí)間：2025-08-25
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問(wèn) 量 ：1887
010-50973130
產(chǎn)品分類(lèi)
輔酶II NADP(H)含量檢測(cè)試劑盒（MTT顯色法）說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào)：BC1100
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱(chēng) | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 酸性提取液 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 堿性提取液 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
| 試劑三 | 液體12mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四A | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
| 試劑四B | 液體5mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑五 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑六 | 液體70 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| NADP標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
| NADPH標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑四：臨用前將試劑四A溶解到試劑四B中，溶解后分裝保存，避免反復(fù)凍融，-20℃保存4周。
NADP標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入 1.27 mL 蒸餾水，即 5 µmol/mL，-20℃可以保存2周。
NADPH標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入 1.2 mL 蒸餾水，即 5 µmol/mL，-20℃可以保存2周。
產(chǎn)品說(shuō)明：
輔酶Ⅱ NADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NADP+和 NADPH 含量測(cè)定可以計(jì)算 NADP（NADPH + NADP+)含量和 NADPH/NADP+比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一，而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過(guò)PMS的遞氫作用，使氧化型噻唑藍(lán)（MTT）還原為甲瓚，570nm下檢測(cè)吸光值，從而測(cè)定 NADPH 含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH，從而檢測(cè)NADP+含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、研缽/勻漿器、超聲破碎儀、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：
如果一次性測(cè)定樣本數(shù)較多，可將試劑一、二、三按比例配成混合液。
反應(yīng)過(guò)程中注意避光。
由于每一個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管，本試劑盒50管可以測(cè)定24個(gè)NADP+或NADPH。
如果測(cè)定吸光值超過(guò)線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
NADPH的測(cè)定：稱(chēng)取 0.1g 綠蘿葉片，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算 ΔA 測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照= A2’- A1’=0.046-0.012=0.034，標(biāo)準(zhǔn)曲線y2=0.332x+0.0136，根據(jù)標(biāo)曲得出x2=0.061，NADPH含量得：NADPH (nmol/g 質(zhì)量）= x2÷W=0.614 nmol/g 質(zhì)量。
NADP+的測(cè)定：稱(chēng)取 0.1g 大兔肝臟，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算 ΔA 測(cè)定= A2- A1=0.217-0.108=0.109，標(biāo)準(zhǔn)曲線y1=0.531x+0.0266，根據(jù)標(biāo)曲得出x1=0.155，NADP+含量得：NADP+ (nmol/g 質(zhì)量）= x1÷W=1.55 nmol/g 質(zhì)量。
NADPH的測(cè)定：稱(chēng)取0.1g 大兔肝臟，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算 ΔA 測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照= A2’- A1’=0.085-0.008=0.077，標(biāo)準(zhǔn)曲線y2=0.332x+0.0136，根據(jù)標(biāo)曲得出x2=0.191，NADPH含量得：NADPH (nmol/g 質(zhì)量）= x2÷W=1.91 nmol/g 質(zhì)量。
NADP+的測(cè)定：取0.1mL馬血清，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算 ΔA 測(cè)定= A2- A1=0.055-0.026=0.029，標(biāo)準(zhǔn)曲線y1=0.531x+0.0266，根據(jù)標(biāo)曲得出x1=0.005，NADP+含量得：NADP+ （nmol/mL）= 11 x1=0.050 nmol/mL。
NADPH的測(cè)定：取0.1mL馬血清，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算 ΔA 測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照= A2’- A1’=0.028-0.012=0.016，標(biāo)準(zhǔn)曲線y2=0.332x+0.0136，根據(jù)標(biāo)曲得出x2=0.007，NADPH含量得：NADPH（nmol/mL）=11 x2=0.080 nmol/mL。
標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋表
NADP+標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表 NADPH 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表
| 序號(hào) | 稀釋前濃度（nmol/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（nmol/mL） | 序號(hào) | 稀釋前濃度（nmol/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（nmol/mL） | |
| 1 | 5000 | 10 | 990 | 50 | 1 | 5000 | 10 | 990 | 50 | |
| 2 | 50 | 100 | 900 | 5 | 2 | 50 | 100 | 900 | 5 | |
| 3 | 5 | 200 | 600 | 1.25 | 3 | 5 | 200 | 200 | 2.5 | |
| 4 | 1.25 | 200 | 200 | 0.625 | 4 | 2.5 | 200 | 200 | 1.25 | |
| 5 | 0.625 | 200 | 200 | 0.3125 | 5 | 1.25 | 200 | 200 | 0.625 | |
| 6 | 0.3125 | 200 | 200 | 0.15625 | 6 | 0.625 | 200 | 200 | 0.3125 | |
| 7 | 0.15625 | 200 | 200 | 0.078 | 7 | 0.3125 | 200 | 200 | 0.15625 | |
| 8 | 0.078 | 200 | 200 | 0.039 | 8 | 0.15625 | 200 | 200 | 0.078 | |
| 9 | 0.039 | 200 | 200 | 0.0195 | 9 | 0 | 200 | 200 | 0 | |
| 10 | 0.0195 | 200 | 200 | 0.01 | ||||||
| 11 | 0 | 0 | 200 | 0 |
輔酶ⅡNADP(H)含量檢測(cè)試劑盒 輔酶ⅡNADP(H)含量檢測(cè)試劑盒
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