ELISA相關(guān)問(wèn)題（三）

更新時(shí)間：2025-08-05

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13. Q：變異系數(shù)（CV）較大的原因？

A：

14. Q：標(biāo)準(zhǔn)曲線較差？

A：

可能原因	參考解決方案
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不當(dāng)	確認(rèn)是否正確稀釋
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶不當(dāng)	標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶前短暫離心，確保是否充分溶解
標(biāo)準(zhǔn)品降解	確認(rèn)保存方式及存放時(shí)間
曲線和標(biāo)度不適合	嘗試不同的擬合方式
邊緣效應(yīng)	試劑盒提前恢復(fù)室溫，保證所有試劑溫度一致
移液出錯(cuò)	使用校準(zhǔn)好的移液器和正確的移液方法
標(biāo)準(zhǔn)品有污染	小心操作，避免污染
錯(cuò)誤的孵育時(shí)間或溫度	按照說(shuō)明書(shū)的流程中操作

15. Q：高背景或陰性對(duì)照值偏高

A：

可能原因	參考解決方案
洗板不充分	將洗滌液注入反應(yīng)孔充分洗滌，充分拍干孔中液體
酶結(jié)合物過(guò)量	檢查酶稀釋度，按說(shuō)明書(shū)標(biāo)識(shí)的稀釋度稀釋
底物污染	加底物前檢查底物是否為透明無(wú)色，請(qǐng)勿用變藍(lán)的底物，重新用新的底物試驗(yàn)
陰性對(duì)照孔被陽(yáng)性對(duì)照污染	注意洗滌時(shí)不要把洗液溢出孔外，不使陰陽(yáng)對(duì)照孔液體漣接一起
不同批次試劑混用	檢查試劑批號(hào)，請(qǐng)勿用不同批次試劑
終止后太長(zhǎng)時(shí)間讀數(shù)	終止后應(yīng)立即讀數(shù)

16. Q：顯色信號(hào)弱

A：

可能原因	參考解決方案
試劑過(guò)期	檢查試劑盒有效期，請(qǐng)勿用過(guò)期試劑
孵育時(shí)間過(guò)短	按說(shuō)明書(shū)中規(guī)定的時(shí)間孵育
試劑污染	檢查試劑是否污染，請(qǐng)勿用污染的試劑
酶標(biāo)儀濾光片不匹配	檢查酶標(biāo)儀設(shè)置及濾光片是否匹配
試劑盒平衡不充分	確保試劑盒試驗(yàn)前平衡至室溫
顯色時(shí)間不夠	增加底物顯色時(shí)間

17. Q：無(wú)顯色信號(hào)

A：

可能原因	參考解決方案
檢測(cè)抗體、酶、或顯色劑漏加	檢查試驗(yàn)操作流程，重復(fù)試驗(yàn)
酶被疊氮鈉污染	請(qǐng)使用重新配制的試劑
試劑添加順序有誤	檢查復(fù)核試驗(yàn)添加順序、流程，重復(fù)試驗(yàn)
波長(zhǎng)不正確	核實(shí)檢測(cè)波長(zhǎng)

18. Q：標(biāo)曲佳但樣品孔無(wú)信號(hào)

A：

可能原因	參考解決方案
樣品中靶標(biāo)物含量低或樣品中無(wú)靶標(biāo)物	設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，重復(fù)實(shí)驗(yàn)
樣品基質(zhì)效應(yīng)影響檢測(cè)	重新稀釋樣品后復(fù)測(cè)
標(biāo)曲選擇不合適	更換擬合方式，選最合適的擬合方式
樣本含量低于靈敏度	濃縮樣本或更換靈敏度更高的試劑盒

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